液相色譜是一類分離與分析技術,其特點是以液體作為流動相,發(fā)展到今天已經(jīng)成為了包括科學研究、工業(yè)生產(chǎn)、環(huán)境保護、食品安全在內多個領域常用的科研分析儀器之一。與此同時,隨著液相色譜的普及,因為儀器故障或者使用不規(guī)范導致的事故新聞也時有發(fā)生,因此,了解液相色譜相關的規(guī)范與使用方法,對于使用者來說尤為重要。今天我們就來聊聊色譜柱的使用。
色譜柱是色譜儀的心臟,若是使用不規(guī)范或者維護不到位,可能會直接影響柱效,縮短使用壽命,甚至造成損壞,因此使用者需要掌握一定的使用規(guī)范。
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況,柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料。因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩。
應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?br>一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
選擇使用適宜的流動相(尤其是ph),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱,分析柱是鍵合硅膠時,預柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內,需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50~75ml。
保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。